SDS-PAGE电泳试剂配制protocol

1、1.5M Tris (PH8.8)

称量181.7g Tris，加入约800ml去离子水充分搅拌溶解，用浓盐酸调节pH值至8.8，定容至1L，高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1M Tris (PH6.8)

称量121.1g Tris，加入约800ml去离子水充分搅拌溶解，用浓盐酸调节pH值至6.8，定容至1L，高压灭菌后，室温保存。

注意：溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃，并置备质量更好的Tris。

3、30％丙稀酰胺（100ml）

称量丙烯酰胺（Acrylamide）29g、双丙烯酰胺（BIS）1g，加入100ml去离子水充分搅拌溶解，用0.45µm滤膜滤去杂质，置于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成分。

4、10％SDS

称量10g SDS加入100ml去离子水，68℃加热溶解，室温保存。

5、10％过硫酸铵

称量1g过硫酸铵，加入10ml去离子水后搅拌溶解，储存于-20℃。

注意：10％过硫酸铵溶液在4℃保存时可使用两周左右，超过期限会失去催化作用。

6、1M DTT（20ml）

称取3.09g DTT，加20ml 0.01M NaOAc (pH5.2)，溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌，-20℃保存。

7、5×SDS-PAGE电泳缓冲液（lL）

Tris、15.1g，Glycine（甘氨酸）、94g，SDS、5g，用去离子水溶解后定容到1L，常温保存。工作时用的是1×SDS-PAGE电泳缓冲液。

8、考马斯亮蓝R-250染色液

往1g考马斯亮蓝R-250中加入250ml异丙醇，在磁力搅拌器上搅拌六小时以上；加入650ml去离子水，磁力搅拌器搅拌过夜；再加入100ml冰醋酸进行溶解，磁力搅拌器搅拌；在通风橱内用滤纸进行过滤，常温保存。

注意事项：在磁力搅拌器上搅拌时，要把容器封口，染色液只能反复用两次。

9、脱色液的配制（1L）

醋酸（冰乙酸）100ml，乙醇（无水乙醇）50ml，去离子水850ml，常温保存。

10、10×PBS（0.1M）

NaH2PO4.2H2O、2.83g，Nacl、85g，Na2HPO4.12H2O、28.98g，用去离子水进行溶解（溶解的非常慢，可能需要过夜）；调PH值到7.2，用0.4µm的滤膜过滤，常温保存，工作时用的是1×PBS。

11、3×SDS-PAGE loading buffer（10ml）

1M Tris-Hcl (PH 6.8)、1.5ml，SDS、0.6g，BPB(溴酚蓝)、30mg，甘油（丙三醇）、3ml
，去离子水、5.5ml；将除BPB以外的试剂完全溶解，SDS常温下很难溶解，可以在37℃水浴溶解，完全溶解后，再加入BPB，进行溶解。

12、浓缩胶

13、分离胶