CCK8

预实验：摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间

1. 在 96 孔板中接种单细胞悬液 (100 μL/孔) ，放在孵箱中培养
   16-24 小时（目的让细胞贴壁，悬浮的细胞是圆形，贴壁的是梭形或者多边性；需用显微镜观察）。

• 可以先加50ul培养基，再加细胞悬浮液50ul

2. 在每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) 。
   沿着孔壁加
   如果有气泡，用针头戳破
3. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时（1h测一次，2h测一次，3h测一次，4h测一次；寻找最佳时间点。控制od值在1左右，随着反应时间增加，od越大）
   孵育成功后采集0点数据

4. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
   新建～振板 10s～ 检测，选择450nm*

   

   image.png

蓝色只加pbs（无细胞）！（还剩6*10）
调零孔：只加培养基，无细胞
对照孔：nc
实验组：siRNA
（每一列加同样处理条件的细胞）

做5板，因为要检测5个时间点。检测完一板丢掉一版。

Cell proliferation assay Cellswereseeded(4,000/well)andmaintainedin96-wellplates.For determination of cell proliferation, a Cell-Counting Kit 8 (CCK8; Dojindo) was used according to the user manual. Fluorescence (450 nm) was recorded in a microplate reader.

细胞一般种3k~4k
不同细胞系要种不同的细胞数