农杆菌侵染拟南芥的转化方法

1、野生型拟南芥培养

野生型拟南芥培养至抽薹开花，可在刚抽薹时将主花序剪掉，使其长出更多的莲座分枝和花序。。

植株健壮，在初花期侵染效果最好。

在转化前一天将花朵和荚果剪掉，培养基质浇水浇透。

2、制备转化用的农杆菌菌液

在灭菌15-20分钟后的超净台中，往灭菌 500mL三角瓶中加入液体LB 200mL、50ng/μL Kan加200μL、20ng/μL Rif 加200μL、200-300μL农杆菌菌液，于28℃摇床180rpm培养至LB呈橙汁色。

3、侵染

将200mL菌液分装到6个50mL离心管中，4000rpm离心15min，倒掉上清。

配置400mL 5%蔗糖溶液（20g蔗糖加ddH2O定容至400mL），再加入60μLSilwet L-77（表面活性剂，终浓度0.03%），混匀。

往6个50mL离心管分别加入25mL5%蔗糖溶液（含0.02%silwet L-77）把菌体混匀洗脱后倒入大皿中，以5%蔗糖溶液（含0.02%silwet L-77）作对照，用5%蔗糖（含0.02%silwet L-77）稀释至OD600 =0.8-1.0。

转化时将花骨朵在溶液中浸泡3-5min左右，将转化好的苗平放于盒子内，不要让侵染液滴到叶片上，否则叶片会死亡。同时尽快放入暗箱，覆膜保湿，避免花序风干。侵染期间注意保温。暗培养24h后，将植株立起正常培养。

二次侵染根据植株的生长状况而定，一般每隔5-7天侵染一次，侵染三次。

Silwet L-77有毒，破坏质膜，使用时戴手套。