WB实验|样本提取以及选购研磨仪

WB实验介绍

“ Western Blot

WB（Western Blot，蛋白免疫印迹）是一种常规的蛋白分析技术，常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

WB实验的基本核心理念是抗原抗体的特异性反应，通过变性胶 SDS-PAGE 将不同分子量的蛋白质分离开，然后转移到固相载体 PVDF 膜上，再用脱脂牛奶作为封闭液进行封闭和一抗稀释液进行稀释。待目的蛋白和抗体充分结合后，用 TBST 洗脱液洗脱掉多余未结合的一抗，加入带有 HRP 标记的对应二抗，这样，我们的蛋白+一抗+二抗形成一个复合物，加以化学发光液，有靶蛋白的位置就会产生荧光，利用胶片或者化学发光仪就可以显现靶蛋白的条带显现。

WB常规实验流程：蛋白提取→蛋白定量→制胶→电泳→转膜→封闭→一抗孵育→一抗洗脱→二抗孵育→二抗洗脱→化学发光→数据分析。

今天我们介绍的是第一步样品的提取以及如何选购合适的研磨仪：

 组织总蛋白提取

准备好所需要数量的样本管；放入研磨珠，置于冰盒上备用；

组织块先用预冷 PBS（SRB003)洗涤 2-3 次，除去血污，然后放在滤纸上，吸尽多余的 PBS 后放入对应的匀浆管中，加入大约 10 倍样本体积的完全裂解液，置于组织研磨仪中，对称放置，确认放置平衡后，盖好盖子，选择程序开始匀浆。

选择研磨仪的考虑因素：

实验目的：首先，要明确WB实验的目的，是需要对整个组织或细胞进行研磨，还是只需要研磨特定的细胞亚群或细胞器。这直接影响着研磨仪的选择。

样本性质：样本的硬度、大小和数量都会影响研磨仪的选择。对于柔软的组织，可以选择具有较大研磨珠的研磨仪，以便更充分地研磨；对于硬质组织，则需要选择具有较小研磨珠的研磨仪，以避免对样品造成过度研。

实验精度：根据实验所需的精度要求，可以选择不同型号的研磨仪。高精度的研磨仪可以获得更均一、更细小的颗粒，但同时也会增加实验时间和成本。

设备功率：根据样本的性质和实验需求，选择具有适当功率的研磨仪，以确保研磨效果和实验效率。

设备大小：根据实验样本的数量和研磨需求，选择适当的设备大小。较大的设备可以同时处理多个样本，提高实验效率，但也会占用更多的实验空间。

WB实验第一期就到这里啦，还有更多步骤会在后续推文中讲解，敬请关注！