miRNA实验干货之如何高效地进行miRNA提取？

microRNA（miRNA）是一种约19-25个碱基、内源性、非蛋白编码和进化上高度保守的单链RNA。miRNA通过转录后基因调控的方式调节遗传信息的流动和表达，与细胞的增殖、分化、凋亡和新陈代谢等密切相关，是生命科学领域的研究热点。

miRNA研究的关键在于如何准确、特异性地检测和定量miRNA，而第一步就是需要将miRNA提取出来。一般miRNA存在于血清、血浆、血液、细胞、细胞上清液及组织等样本中。不论是何种样本，miRNA提取的难点都是普遍存在的，主要分为两个方面：

1）miRNA自身因素

[if !supportLists]①　[endif]miRNA含量极少：以典型的单个快速生长的哺乳动物细胞为例，其中含有10-30pg总RNA，而miRNA占比只有0.003－0.02％；如果样本为血清血浆，则其中miRNA的含量会更低，因为血清血浆中不含细胞；

[if !supportLists]②　[endif]miRNA本身分子较小：只有约19–25个核苷酸大小，用传统方法进行提取的过程中非常容易丢失；

2）提取层面

传统的Trizol法及其它常用的RNA提取试剂盒提取的是较大分子的RNA，包括rRNA和mRNA，而对miRNA的提取效果显著不佳，可能是因为如此小的核酸分子不易被醇类沉淀、也不易被核酸纯化膜和磁珠吸附捕捉的原因。

因而，要较好地提取miRNA，必须采取一些新的思路和方法。根据目前的研究结果，miRNA富集法应该是一种不错的选择。其原理为，先使用富集试剂将含量较低、分子量较小的miRNA聚集在一起，再使用核酸纯化柱进行提取。显然，miRNA聚集后更加有利于miRNA的吸附和捕捉，从而得以有效地提升miRNA的提取得率。目前，国内有类似技术的公司不多，其中，Qiagen、BIOG miRNA富集提取试剂相对效果较好。