人正常结肠上皮细胞(NCM460)培养要点

该细胞来源于西班牙裔,来自胃癌患者的正常结肠;粘膜组织。倍增时间:32-38小时(INCELL),自发性永生化细胞系。

该株细胞DNA分型在细胞系检索中没有找到匹配的细胞系。本次检测在该细胞系中没有发现多等位基因。该细胞系为单一来源人源细胞,未发现交叉污染,因数据库未收录细胞系NCM460 相关STR数据信息,显示无匹配结果,该样本与NCM460对照细胞系STR基因型完全匹配。

细胞名称:人正常结肠上皮细胞(提供STR鉴定报告)

细胞简称:NCM460

产品货号:TCH-C450

种属来源:

组织来源:结肠

细胞形态:上皮细胞样

生长特性:贴壁生长

培养体系:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

配套培养基货号:TCH-G450

传代比例:1:2-1:6,每2-3天换液一次

传代周期:24-36 h

培养条件:气相:95%空气+5%CO2,温度:37℃

冻存条件:60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO,液氮储存

质量检测:细菌、真菌、支原体检测均为阴性

NCM460细胞培养注意事项

1. 部分细胞在传代后时,会有以下现象:

细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、 培养基漂浮一些死细胞。以上都是细胞培养常见现象,不影响细胞增殖和实验。

细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡、细胞器折光或者细胞膜表面物质,这个属于细胞自身特性,无法清除也无法改变,具体情况可以参考 ATCC、DSMZ 等大型细胞 库细胞照片。

细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片,可以吸走培养基后用 PBS( E2119)润洗;润洗不能清除的可以消化细胞重新接种,消化完成后加完全培养基终止消化,混匀细胞,收集细胞悬液 900-1000rpm(约 150g)离心 3min,弃上清。再加 5ml PBS 重悬细胞,再离心后,用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次 PBS重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略 PBS重悬的步骤;如果碎片很多,建议 PBS多洗几次。

2. 细胞对于消化比较敏感,消化过度会严重影响细胞状态,导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。不同品牌胰酶溶液成分不一样,消化活性差别比较大,更换胰酶品牌时需重新摸索消化时间,以消化到细胞间隙变大但未漂浮为准,此时结束消化最佳,避免消化过 度导致细胞死亡。细胞消化后比较脆弱,吹打力度不要过大,不要产生过多气泡, 否则会严重影响细胞状态。

3.不同细胞生长速度差异较大,所有细胞收货后首次传代建议按 1:2 传代。正常培养 时生长较慢、密度较低的细胞需要传代时按 1:2 传代,生长较快、密度较高的细胞 可以按 1:4 传代。

4. 细胞生长偏慢时,可以提高 5-10%血清浓度(血清总浓度不超过20%)培养一段时间,待细胞状态和生长速度恢复正常后换回正常血清浓度

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作者:zhangchen
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来源:TechFM
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