关于色谱柱的清洗和保存

written in 20241217 00:08
总体执行结论：

1. 检测氨基酸常用的色谱柱为C18柱子。
2. 柱体积规格为4.6mmx150mm；柱子体积为1.5mL，20倍柱体积为30mL,0.8mL/min 20倍柱体积需要运行37.5min；
3. 检测平衡为含盐的流动相，故通常使用15%甲醇水-60%甲醇水-纯甲醇-80%甲醇封存。
4. 再次使用时则从80%甲醇水-15%甲醇水-流动相-检测。每一阶段建议20倍柱体积。
5. 短期封存洗完盐后使用纯甲醇封存，长期则80%甲醇水封存。
6. 柱体积（一般为20倍），计算公式是：柱体积=π（柱内径/2）²柱长度*60%,常用规格的色谱柱柱体积可以参考下表：
   

   image.png
7. 使用前活化的目的：因为色谱柱从出厂到用户手中会有一定的时间，填料可能会有些干枯，活化能让填料充分润湿、碳链舒展彻底，也能去除色谱柱中的杂质。建议使用纯甲醇或纯乙睛来活化色谱柱，用梯度时间程序的功能来便捷的进行活化过夜，以最常用的4.6mm*250mm的色谱柱为例，可以设定以下的流速梯度时间程序：
8. 盐析的问题：
   盐析即高浓度（一般为20mmol/L）以上缓冲盐流动相遇到有机相不互溶从而形成结晶颗粒，这些颗粒会堵塞液相管路及色谱柱。平时会在不锈钢管路各个接头处发现白色颗粒析出，这就是盐析。
   容易发生盐析的可能原因：
   A. 非混合流动相，使用四元低压梯度液相用两个及以上流路时，梯度比例阀处容易盐析。
   B. 色谱柱的保存液是纯有机相，未进行高水相过渡就直接使用缓冲盐流动相。
   C. 二元高压梯度液相，因流路少不能自动冲洗色谱柱，晚上做完实验直接自动关机。
   D. 未使用柱温箱，房间也没有恒温措施，夜间室温降低。

网络资料参考 Reference from

1. https://support.shimadzu.com.cn/an/resource/29760.html 岛津的为主要参考
2. http://www.labptp.com/knowledge/show-145.html
3. https://lab.jgvogel.cn/c/2021-01-12/1007695.shtml
4. https://bbs.instrument.com.cn/topic/8449062