微观舞台上的精彩反应

想象一块酶标板，它是微观反应的舞台。抗大鼠IL-1β抗体提前在板上“站位”，当样品或标准品中的IL-1β出现，就如同演员登场，迅速与抗体结合。紧接着，辣根过氧化物酶标记的抗体也来“凑趣”，形成稳固的抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。一番“洗涤”，把游离的“小角色”都请出去。加入显色底物TMB，在酶的催化下，溶液从无色变成蓝色，再加入终止液，瞬间变成黄色。这颜色的深浅，就和IL-1β的浓度紧密相关，用酶标仪一测，秘密就“藏不住”啦。

实验前的精心筹备

实验前，得把试剂盒和样本从冰箱里请出来，提前60分钟让它们在室温下“醒醒神”。从冰箱拿出来的浓缩洗涤液若有结晶，别慌，室温放放，轻轻摇摇，等结晶溶解后，按1:20用蒸馏水稀释成工作液。

多样样品的收集窍门

血清样品，全血室温放2小时或4℃过夜，2000prm转速离心20分钟取上清；血浆用EDTA钠盐抗凝，采集后30分钟内2000prm转速离心15分钟；组织匀浆得用预冷PBS冲洗、剪碎，按1:9比例加PBS在冰上研磨，还能超声或反复冻融后离心取上清；细胞提取液，贴壁细胞先清洗、消化、离心，悬浮细胞直接离心，收集后用PBS洗涤，重悬再反复冻融，最后离心取上清；细胞培养上清或其他生物体液，2000prm转速离心20分钟取上清。

严谨的实验操作流程

先算出要用多少板条，取出放好，剩下的密封放回4℃。让试剂盒和样本在25 - 28℃充分平衡60分钟。设置好标准品孔、样本孔和空白孔，分别加入对应液体。接着加入HRP标记的检测抗体，封板膜封住，37℃温育45分钟。洗板5次后，加入底物A、B，37℃避光孵育15分钟，最后加终止液，15分钟内在450nm波长测OD值。

结果计算与注意事项

以标准品浓度为纵坐标，OD值为横坐标画标准曲线，通过样品吸光度值和曲线算出浓度，再乘稀释倍数。实验时要注意，终止液有腐蚀性，别碰到皮肤和衣物。试剂盒仅供科研，不能用于临床。而且要妥善处理耗材，避免污染环境。只有严格按照步骤操作，才能在这场微观探索中收获准确的结果，为科研助力 。