在生命科学研究领域，对人 CXC 趋化因子受体 3（CXCR3）的研究对于理解免疫调节、炎症反应以及疾病发生发展机制至关重要。睿信生物提供的相关实验材料和方法，为科研工作者深入探究 CXCR3 奠定了基础。下面为大家详细介绍使用睿信生物相关产品进行人 CXC 趋化因子受体 3 实验的操作流程。

一、实验前准备

（一）样本准备

1. 样本采集：根据实验目的，可采集人体的血液、组织等样本。若采集血液样本，使用无菌采血管收集静脉血，避免溶血。若是组织样本，应迅速从手术切除或活检组织中获取，尽量减少样本离体后的时间，以保持 CXCR3 的活性和表达稳定性。

1. 样本处理：对于血液样本，采集后需尽快进行离心处理，分离出血清或血浆。一般在 1000 - 1500 转 / 分钟，离心 10 - 15 分钟。血浆样本需根据实验要求添加适当的抗凝剂，如 EDTA 或肝素。组织样本则需在无菌条件下，将其剪切成小块，放入含有合适裂解液的匀浆器中，充分匀浆，使细胞破碎，释放出 CXCR3。匀浆过程需在冰浴中进行，以防止蛋白质降解。

（二）试剂准备

1. 试剂盒检查：使用睿信生物提供的人 CXC 趋化因子受体 3 检测试剂盒，在使用前仔细检查试剂盒的完整性和有效期。确保试剂盒内的各种试剂齐全，无漏液、变质等情况。

1. 试剂平衡：将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出后，放置在室温（20 - 25℃）下平衡 30 - 60 分钟，使试剂温度与实验环境温度一致，以避免因温度差异导致实验误差。同时，按照实验所需用量，准备好适量的蒸馏水或去离子水，用于稀释试剂和清洗实验器具。

二、实验操作步骤

（一）包被

1. 在酶标板的相应孔中加入适量的包被液，包被液中含有针对 CXCR3 的特异性抗体。每孔加入量一般为 50 - 100μl，具体根据试剂盒说明书要求。

1. 将酶标板轻轻振荡混匀，使包被液均匀分布在孔内。然后将酶标板用封板膜密封，放置在 37℃恒温培养箱中孵育 1 - 2 小时，使抗体牢固地结合在酶标板的孔壁上。

（二）洗板

1. 孵育结束后，将酶标板从培养箱中取出，弃去孔内的包被液。使用洗板机或手动方式，用洗涤液对酶标板进行洗涤。洗涤液一般为含有吐温 - 20 的磷酸盐缓冲液（PBS - T）。

1. 每孔加入 200 - 300μl 洗涤液，浸泡 1 - 2 分钟后，将洗涤液甩干或吸干。重复洗涤步骤 3 - 5 次，确保彻底去除未结合的抗体和杂质，减少非特异性吸附。

（三）加样

1. 将准备好的样本加入到已洗涤干净的酶标板孔中。每个样本设至少 2 个复孔，以提高实验的准确性和可靠性。每孔加入样本量一般为 50 - 100μl，轻轻振荡混匀。

1. 同时，设置标准品孔。将睿信生物提供的 CXCR3 标准品按照说明书要求进行梯度稀释，得到不同浓度的标准品溶液。然后将不同浓度的标准品依次加入到酶标板的标准品孔中，每孔加入量与样本孔相同。

（四）孵育

1. 加样完成后，再次用封板膜密封酶标板，将其放置在 37℃恒温培养箱中孵育 1 - 2 小时。在孵育过程中，样本中的 CXCR3 与包被在孔壁上的抗体特异性结合，形成抗原 - 抗体复合物。

（五）加酶结合物

1. 孵育结束后，按照洗板步骤，用洗涤液对酶标板进行 3 - 5 次洗涤，去除未结合的样本和杂质。

1. 洗涤完毕后，在每孔中加入适量的酶结合物，酶结合物中含有与 CXCR3 特异性结合的抗体，并标记有酶。每孔加入量一般为 50 - 100μl，轻轻振荡混匀。

1. 再次用封板膜密封酶标板，放置在 37℃恒温培养箱中孵育 30 - 60 分钟，使酶结合物与已结合在孔壁上的 CXCR3 充分结合。

（六）洗板与显色

1. 孵育结束后，重复洗板步骤，用洗涤液对酶标板进行 5 - 7 次洗涤，确保彻底去除未结合的酶结合物。

1. 洗涤完毕后，在每孔中加入适量的显色底物。显色底物一般为过氧化氢和四甲基联苯胺（TMB）等。每孔加入量一般为 50 - 100μl，轻轻振荡混匀。

1. 将酶标板放置在室温下避光显色 15 - 30 分钟，随着酶催化底物反应，溶液逐渐显色，颜色的深浅与样本中 CXCR3 的含量成正比。

（七）终止反应

1. 当显色达到合适的程度时，在每孔中加入适量的终止液，终止液一般为硫酸溶液。每孔加入量一般为 50 - 100μl，轻轻振荡混匀。终止反应后，溶液颜色由蓝色变为黄色。

三、结果分析

1. 读数：使用酶标仪在特定波长下（一般为 450nm）读取酶标板各孔的吸光度值（OD 值）。读取前，需确保酶标仪已预热并校准，以保证读数的准确性。

1. 绘制标准曲线：以标准品的浓度为横坐标，对应的 OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。也可使用专业的数据分析软件进行绘制和计算。通过线性回归分析，得到标准曲线的方程。

1. 计算样本浓度：根据样本的 OD 值，代入标准曲线方程中，计算出样本中 CXCR3 的浓度。对于复孔样本，取其平均值作为最终结果。同时，需计算实验的变异系数（CV），以评估实验的重复性和准确性。一般要求 CV 值小于 10%，若 CV 值过大，需重新检查实验操作和数据，必要时重复实验。

通过以上详细的实验操作流程，使用睿信生物的相关产品和方法，科研工作者能够准确、高效地检测人 CXC 趋化因子受体 3（CXCR3），为深入研究其在生理和病理过程中的作用提供有力的数据支持。在实验过程中，需严格遵守操作规程，注意实验细节，以确保实验结果的可靠性和准确性。