热启动Taq酶试剂的比较

热启动Taq酶由于能够很好的解决PCR中常出现的非特异性扩增、引物二聚体形成等问题,同时有效提高了目标基因的扩增成功率及产率,因而一直以来都备受科研人员的青睐。而一种扩增效率高、酶动力强、灵敏度高的热启动Taq酶对后续的实验更是能起到积极的作用。

目前,国内市场上销售的热启动Taq酶的品牌很多,但真正高质量的热启动Taq酶并不多,国外品牌有ABI、Bioline等,国内品牌有Starvio、Probegene等。面对各品牌的热启动Taq酶,怎么选是关键。

选择高扩增效率的热启动Taq酶对PCR、qPCR能否成功很重要。我们实验室对国内常用品牌的热启动Taq酶曾经进行过比较,将人RNase的一个片段质粒5倍梯度稀释,将qPCR结果做成标准曲线,结果ABI和Starvio热启动Taq酶扩增效率都在95%以上,每反应体积能够检测的最低量可达2pg(如图1),而某国际知名品牌T的热启动Taq酶的扩增效率只有90%,在模板量为2pg时无扩增曲线。

图1. StarvioHC热启动Taq酶扩增人RNase的一个片段。以1ng人基因组DNA为模板,5倍系列稀释。可见,StarvioHC热启动Taq酶具有较高的反应灵敏度(1.6pg),重复性好,线性范围宽。

除了以高扩增效率为热启动Taq酶的选择标准外,对于酶动力强这一点,我们也曾比较过多家公司的热启动Taq酶。在国外品牌中,英国Bioline公司的热启动Taq酶(lmmulase)酶动力较好,可做4重PCR,等量起始模板CT30时的荧光信号值最高。在国内品牌中,Starvio热启动Taq酶的指数期较长,可支持4重以内的PCR检测反应、目扩增曲线的“S”型不受影响(图2)。其它的国产品牌一般只能支持2重反应,在做3重反应时,扩增曲线低矮,荧光信号值较低,无典型扩增曲线,结果很难判定。

图2. 使用StarvioHC热启动Taq酶检测呼吸道病原体感染。1为内参基因扩增曲线,2为肺炎支原体扩增曲线,3为呼吸道合胞病毒扩增曲线,CT值分别为25.2、26.6、28.8。以上可见,StarvioHC热启动Taq酶具有扩增曲线典型,酶动力强劲,适合多重检测等显著优点。

此外,灵敏度也是我们在选择热启动Taq酶需要着衡量的标准。有些样本中目标基因的丰度很低,非常考验热启动Taq酶的检测灵敏度,灵敏度高了,实验数据自然更加真实可靠。我们将Starvio热启动Taq酶与T品牌的热启动Taq酶进行对比(如图3):同一份呼吸道拭子样本,用Taqman探针法检测肺炎支原体, Starvio热启动Taq酶比T品牌的热启动DNA聚合酶检测结果早2个CT。可见,Starvio热启动Taq酶拥有超高的灵敏度,较部分同类化学封闭的热启动DNA聚合酶相比,更适合用于低丰度样本的检测。

图3. 同一份呼吸道拭子样本,Taqman探针法检测肺炎支原体, StarvioHC热启动Taq酶(1)比知名品牌供应商T热启动DNA聚合酶(2)检测结果早2个CT。

总的来说,目前国内市场上比较知名的国外品牌如ABl、Bioline等公司的热启动Taq酶性能较好,国产热启动Taq酶中,Starvio热启动Taq酶的扩增性能不错,与国外名牌产品无明显差异,其它很多国产品牌的扩增性能不够理想,研究者需根据自己的实验要求和经费情况进行选择,最好做一个梯度稀释扩增实验,以检测热启动Taq酶的扩增效率和灵敏度。

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作者:ht
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来源:TechFM
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