使用Snapgene设计同源重组引物并输出融合载体（Mac、Windows均适用）

同源重组是目前最常用的构建载体的方法之一，同源重组的引物设计也有多种方法。今天简单介绍下如何利用SnapGene软件设计同源重组引物。

首先需要准备表达载体序列与目的基因序列

1.打开质粒图谱，依次在工具栏中点击：Actions-In-Fusion Cloning-Insert Fragment（这里插入片段若为一个则选择第一个，若为两个则选择第二个，以此类推，这里以插入一个片段为例）如图所示：

选择infusion插入片段

2.选择线性化方式，这里使用双酶切线性化，并选择酶切位点；

选择双酶切及酶切位点

3.点击上方的第二个选项卡，选择拟插入的基因文件，并点击Ctrl+A全选片段

选择插入片段

4.点击上方第三个选项卡，选择PCR引物选项，填入退火温度，并选择是否保留酶切位点后点击Choose Primers

选择退火温度及是否保留酶切位点

5.得到融合载体图谱，如图所示

得到融合载体图谱

6.点击下方第四个选项卡，得到同源重组引物；

得到同源重组引物

7.点击右下角Clone，得到融合载体的.dna文件，即可保存。

融合载体