实验技术 | 微量RNA测序技术：解码生命，助力科研

  在现代生命科学研究中，RNA测序技术已经成为揭示基因表达和调控机制的关键工具。然而，对于许多珍贵或难以获取的样本，传统的RNA测序技术往往因为样本量不足而无法满足研究需求。这时，微量RNA测序技术应运而生，突破了样本量的限制，为科研工作者提供了新的可能性。

一、 技术优势与特点

1

高灵敏度：低至50ng RNA 或 5×104个细胞即可检测

2

均一性高

3

重复性好

二、适用范围

01   临床样本分选的少量细胞

02   难以获取的标本

03    较少量的细胞样本

04    小鼠分离的少量细胞

05    浓度较低的RNA样本

三、实验流程

1. 提取建库测序流程

2. 生物信息学分析流程

四、质控

       Reads 碱基错误率分布图

GC 含量分布图

五、结果展示

差异基因火山图

差异基因聚类图

KEGG富集和弦图

六、送样指南

         

七、样本采集与处理

1. 样品类型：细胞、新鲜组织或RNA样品； 

2. 细胞样品：培养诱导结束后，去除培养液，加入适量专门的细胞裂解液，投入液氮冷冻，然后于液氮中存放或转入-80°C超低温冰箱保存；

3. 全血样本应分离白细胞：加入适量专门的细胞裂解液，投入液氮冷冻，然后于液氮中存放或转入-80°C超低温冰箱保存；

4. 动物组织：准确切取所需组织后，在RNase-free的生理盐水中迅速漂洗样本，以去除血渍和污物。用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹组织，迅速投入液氮冷却。后于液氮中存放或转入-80°C超低温冰箱保存；

5. 临床标本：准确切取所需组织后，用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹组织，立即投入液氮冷冻。后于液氮中存放或转入-80°C超低温冰箱保存；

6. 植物组织：准确取得所需组织后，立即放入进口冻存管中，投入液氮冷冻，然后于液氮中存放或转入-80°C冰箱保存。

八、应用

1. 癌症研究： 

 （1）癌症标志物发现：用于筛选和验证早期诊断标志物； 

 （2）肿瘤异质性分析：分析肿瘤内部不同区域的基因表达差异，揭示肿瘤进展、转移和耐药机制； 

 （3）微环境研究：研究肿瘤微环境中免疫细胞与肿瘤细胞的相互作用。 

2. 疾病机制与分子标志物研究 

3. 药物靶点筛选 

4. 再生医学与干细胞研究：研究干细胞分化和组织再生过程中的基因表达变化。 

5. 发育生物学研究：揭示胚胎及器官发育过程中基因表达的动态变化，理解发育调控机制。 

6. 微生物与病毒研究： 

 （1）病毒感染与宿主反应：研究病毒感染后的宿主基因表达变化，发现新的抗病毒策略； 

 （2）微生物群落与宿主健康：分析微生物群落的RNA表达，研究其对宿主健康的影响。 

7. 环境与生态研究： 

 （1）环境应激反应与生态评估：研究生物体在环境变化中的RNA表达，评估生态系统健康； 

 （2）物种多样性与适应性进化：分析不同环境中的生物多样性和基因表达，探索物种适应性进化机制。 

8. 农业与食品科学研究：

 （1）作物抗逆性与育种：研究作物在逆境中的RNA表达，指导抗逆性育种； 

 （2）食品安全与动植物育种：通过RNA测序提升食品安全和动物、植物的育种效率。 

9. 法医学与人类学研究：

 （1）法医学分析：利用RNA测序技术分析法医学样本； 

 （2）人类起源与进化研究：研究古代人类的RNA表达，揭示人类演化历史。

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