HL-1 细胞模型

HL-1 细胞是一种心房肌细胞系，来自于AT-1小鼠的心房肌肿瘤组织，在保持自主收缩性的同时还具有与心房肌细胞相类似的生物学和电生理学特征，是研究心房肌细胞的可以传代的细胞株。

基于HL-1细胞具有连续传代，自主收缩，并保持有正常心肌形态学、生物化学和电生理学特性的基础上，建立HL-1房颤细胞模型；此模型具备了急性分离心肌细胞的时效性，同时还具有体内模型的稳定性，此外还可以排除其它不确定因素的干扰；

参照文献将HL-1细胞接种于含明胶/纤维结合蛋白的培养皿中，72 h倒置显微镜观察细胞呈融合状态，以1～3Hz去极化；更换培养液为正常 Tyrode 液 (mmol/L：NaCl 137，KCl 5.4，MgSO4 1.2，CaCl2 1.8，KH2PO4 1.2，Glucose 22，HEPES 10，pH 7.4)，在培养皿中置入两个并联铂电极，用YC-3双极型程控刺激器于 37℃，5 %CO2 孵箱中给予刺激，刺激频率为600次/min，强度1 V/cm，连续刺激 24 h，建立快速起搏的HL-1房颤细胞模型。

膜片钳技术

【膜片钳 1】膜片钳的基本概念及原理
【膜片钳 3】膜片钳技术简介——仪器设备介绍+玻璃微电极介绍

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参考文献

糖基化终产物——促进糖尿病房颤易感性
miR-208b对小鼠HL-1房颤细胞钙超载的影响及其机制分析
HL-1细胞培养及房颤细胞模型的建立

秋水仙碱防止术后房颤

秋水仙碱与心脏 - PMC (nih.gov)

思路参考

共生微生物衍生的 SCFA 通过 GPR43/NLRP3 信号转导缓解心房颤动 - PMC (nih.gov)
开眼界了——肠道短链脂肪酸通过NLRP3缓解房颤
晚期糖基化终产物诱导心房肌细胞衰老并增加糖尿病小鼠心房颤动的易感性 - PMC (nih.gov)

WB检测 小鼠心房组织中的Cav1.2，Kv4.3和Kv1.5蛋白水平显着降低

APD50和 APD90
评估用 AGEs、APA 和 APD 处理的 HL-1 细胞中 APD 的变化50、APD的90在电流钳位模式下进行评估。
Western blotting检测AGEs处理的HL-1细胞中Cav2.1和Kv5.1的蛋白水平

为了进一步证实AGEs通过p16/Rb通路介导衰老和心房电重塑，使用小干扰RNA（siRNA）敲低p16或Rb。 Western blotting显示，与AGEs组相比，AGEs+p16‐siRNA组的Rb蛋白表达降低

HL-1 细胞模型

评估用脂肪代谢抑制剂处理的 HL-1 细胞中 APD 的变化50、APD的90在电流钳位模式下进行评估。Western blotting检测AGEs处理的HL-1细胞中Cav2.1和Kv5.1的蛋白水平

观察脂肪代谢抑制剂对单核细胞系THP-1的作用 （这里也可以使用房颤患者外周血分离的单核细胞）

siRNA 处理后，细胞系的炎症水平，细胞状态，增殖，凋亡等

小鼠模型

通过迷你渗透泵持续泵入血管紧张素Ⅱ(2mg/kg/d)14天,在10-12周龄的雄性C57BL/6N野生型小鼠中建立血管紧张素Ⅱ模型。

葡萄糖酸氯己定诱导的小鼠房颤模型，用小动物呼吸机辅助机械通气并给予异氟烷麻醉小鼠,开胸后在小鼠心房表面均匀涂抹不同剂量无菌性葡萄糖酸氯己定。

看房颤诱发情况：手术后第4天运用体表心电图和食道心房调搏技术诱导房颤发作,检测各组小鼠房颤诱发率和房颤持续时间。

将小鼠处死,留取左右心房组织。
1、HE染色检测各组小鼠心房组织炎症细胞浸润情况,
2、Masson染色检测各组小鼠心房组织胶原含量,α-SMA染色检测心房α-SMA表达变化,CD68染色检测心房组织巨噬细胞浸润情况。
3、ELISA检测各组小鼠心房组织IL-6和IL-10水平。RT-PCR方法检测各组小鼠心房组织炎症相关因子IL-6、IL-10、TNF-α以及纤维化相关指标TGF-β、collagen-1、collagen-3,collagen-4、α-SMA的mRNA表达变化。
4、Western Blot检测心房组织STAT3磷酸化情况。
5、评估心房肌细胞中 APD 的变化50、APD的90在电流钳位模式下进行评估。Western blotting检测细胞中Cav2.1和Kv5.1的蛋白水平

持续性房颤患者单细胞测序（这一步也可以分离患者的单核细胞去测序）

3个实验组/3个正常对照