原代细胞分离技术

原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，也称初代培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。原代培养的过程指动物的组织或器官从机体取出后，经机械法或各种酶类（常用胰蛋白酶）和鳌合剂（常用EDTA）处理，使之分散成单个细胞，加入适量培养基，置于合适的培养容器中，在无菌、适当温度和一定条件下，使之生存、生长和繁殖的过程。

原代细胞保持了体内原始细胞的生物学特性，最接近于体内的生长特性。因此，它们为研究生物体细胞的生长、代谢和繁殖提供了有力的工具。此外，原代细胞培养还为精准医疗的肿瘤诊治模式和个体化精准用药提供了支持。

常见的原代细胞类型包括上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、黑色素细胞、神经元、星形胶质细胞、肝细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、成骨细胞、肌细胞、软骨细胞、脂肪细胞、滑膜细胞、毛细胞、血细胞和干细胞。

原代细胞的优缺点

原代细胞实验原理

在原代细胞分离培养中，首先从动物体内取出各种组织，然后采用不同的方法，如酶消化（通常使用胰蛋白酶/胶原酶）、螯合剂（通常是EDTA）或机械分散，将组织分散成单个细胞。这些单细胞被放置在适当的培养基中进行培养，以在离体环境中存活、生长和繁殖。这个过程称为原代培养，主要包括取材、分离和培养三个步骤。

以小鼠结肠细胞为例，为了提高目标细胞的纯度，原代提取的细胞通常与其他细胞混合。通过采用生物酶梯度消化和差速贴壁等方法，可以获得纤维组织和上皮组织的高纯度目标细胞。具体地，使用胶原酶 I 和分散酶 II 消化结肠组织可分散细胞间质，而差异消化和差速贴壁方法则能有效去除成纤维细胞，最终获得高度纯净的结肠上皮细胞。

原代细胞培养注意事项与常见问题

原代细胞培养具有较高的成本，并对培养条件有严格要求。因此，在培养过程中需要特别注意保持无菌环境，并尽可能去除目标细胞以外的其他细胞。

1.在实验开始前，必须对所有器械进行消毒处理，并进行高压灭菌，液体则需要进行无菌过滤处理。

2.酶消化液必须立即现用现配，以确保其活性。

3.在实验过程中，需要充分消化组织以确保检测到足够数量的细胞。

4.同时，也要尽可能充分去除成纤维细胞。

5.在后续的培养过程中，必须保持全程无菌操作，以确保培养环境的纯净性。