稳转细胞株构建原理

稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。

稳定细胞系建立的原理

将外源DNA/shRNA克隆到带有某种抗性基因的载体上，重组载体被转染至宿主细胞并整合到其染色体中，并能随细胞分裂稳定传递下去，用载体中所含抗性基因进行筛选。常用的真核表达载体抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、杀稻瘟菌素（blasticidin)和嘌呤霉素(puromycin)。

慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组，效率很高，慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法 。

在什么情况下需要建立稳转细胞系？

①需要长期在目的细胞中研究基因功能，通过建立稳转细胞系，可以降低频繁转染或者病毒包装的成本，方便实验研究；

②部分蛋白半衰期极长，瞬时RNA只能干扰表达，无法去除已经表达的目的蛋白，通过构建稳转细胞系可以实现更好的基因干扰效果；

③瞬转会引入极高拷贝数的表达，导致因为人为因素造成实验结果的不精确，建立稳转细胞系可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究；

④需要用诱导表达系统的，主要是一些致死基因或者是需要时空表达的；

⑤需要用细胞做动物实验的，比如裸鼠成瘤等，往往需要建立稳转细胞系。