如何选择合适胎牛血清？

胎牛血清在生物医学研究，以及细胞培养领域中，应用广泛。胎牛血清含有丰富的生长因子、蛋白质和其他生物分子，对细胞生长和增殖具有重要作用。

胎牛血清的优点

· 提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

· 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

· 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

· 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

· 起酸碱度缓冲液作用。

· 提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

血清的质量对实验成败起着关键性作用，但血清使用不当也可能会导致血清质量下降，造成细胞培养效果不理想。那么血清使用中的一需要注意些什么？如何选择适合的血清呢？

1. 血清的正确溶解方法

将血清从冷冻冰箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融，或通过水浴锅促使其溶解。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。完全溶解后建议尽快使用，若长时间储存在2-8℃，血清中的各种（脂）蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能因凝集而形成沉淀或可见的混浊。融解后的血清请放置于4℃冰箱中保存，但不要超过1周。

注意：如果实验对细胞培养体系纯净度有较高要求，则建议离心（500g，5min）去除析出物。

若融解后的血清短期内无法用完，请务必分装至合适规格保存于-20℃冰箱内。预计您每次或每周实验所需量，选取适宜规格的容器，分装后可在合适的条件下长期保存。

注意：选取的用以分装血清的容器务必保证无菌、坚固、密封性优良。血清在冷冻时可能出现过冷现象，即温度低于冰点依然为液态，这是正常现象，不会影响血清质量。

2. 使用前需要离心吗？

这个问题有以下两种可能：

（一）因为血清融解后有“絮状物”析出。

如果没有出现其他异常情况，或者血清只是用于细胞培养，那么完全没有必要离心去除。我们知道血清析出的“絮状物”主要是血纤蛋白，其在血清中含量很高，而且高度不溶，在血清冻融过程中极易析出，但它也是完全无害的，甚至能促进细胞生长。另外，它还增强了血清黏性，为细胞提供了额外的机械缓冲。在其析出过程中，会粘附培养体系中其他成分，离心去除，反而会损失营养成分。

（二）实验要求纯净的培养体系。

培养的细胞需要进一步鉴定，如免疫荧光、流式、共聚焦拍照等，细胞表面如果有黏性较强的血纤蛋白，势必会影响效果。那么，建议400g离心5min即可。如果需要进行精密实验，如分离外泌体等，那么就需要至少100000g离心1.5h以上。

3. 怎样确定血清使用浓度？

这个需要通过测试。

原则上血清添加量不要太多，通常分为5%、10%、20%几档。部分细胞原代提取时会使用20%血清，大部分细胞正常培养时会使用5%～10%的血清浓度。至于某一株细胞适应什么样的血清浓度，还需要根据细胞特性、实验目的做测试和调整。

4. 如何避免血清中产生沉淀？

1.解冻时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一。

2.分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡）。

3.切勿由-20℃直接至37℃水浴锅解冻，较大的温差，易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

4.切勿将血清置于37℃过长时间，否则可能使之浑浊，其中一些不稳定的组分也会因此受到影响，最终降低血清的品质。

5.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

6.若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且保持摇晃均匀。温度过高、时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

5. 怎样为您的细胞选择合适的血清？

目前市面上的血清产品五花八门，各种品牌宣称来自各个血源地，让人眼花缭乱。可以确定的是，除了所谓的“水货”，它们当中绝大多数都是质量合格的产品。但合格不一定好用，或者说适用于某一种细胞。要确定一款血清的性能，或者从众多血清来源中挑选一款，唯一的办法就是筛选验证。

血清的筛选验证主要包括：形态验证、增殖能力测试和克隆形成能力测试。通过多次传代，分辨同细胞、同代次、不同血清样品培养的细胞形态间的细微差异；或者同血清样品、不同细胞、不同代次间、细胞形态维持的情况。通过同一细胞多次传代，每代接种相同细胞量，间隔相同时间后计数得到单位时间倍增数，确定增殖性能。又通过不同细胞在相同培养面积内接种相同的少量的细胞，根据形成的单克隆数量、大小，判断血清支持克隆形成的能力。

一款血清需要综合达到这几个性能的高水平表现，才能称为好血清。或者一款血清在培养某种细胞时，这几个方面的表现都优秀，才是最适用的。