MMR结果与MSI状态不一致，原因有哪些？

一、MMR是什么？

DNA在复制过程中受外源或内在因素的影响会发生各种各样的错误，比如单/双链断裂、碱基错配、交联损伤等等。幸运的是针对DNA损伤人体具有自我修复调节的系统，才得以保持机体正常运转。其中错配修复系统（MMR，mismatch repair）可修复DNA复制时产生的碱基错配错误，进而维持基因组的稳定性。

错配修复系统家族成员包括MLH1，MSH2，MSH6和PMS2等蛋白，错配修复蛋白家族由两个错配修复功能的复合体构成，其中MLH1和MLH2是两个复合体内的主要功能蛋白。

错配修复系统缺陷（dMMR, deficient mismatch repair）是由于这些蛋白功能出现了异常。通常可以用免疫组化（IHC）的方法检测以上4个MMR 蛋白表达情况，任一MMR蛋白缺失即为dMMR。4个蛋白表达均正常则为pMMR。

二、MSI又是什么？

微卫星（microsatellite, MS）是一些短而重复的DNA序列，常见类型为双碱基CA/GA/GT或单碱基A/T串联重复等，且多以1-6bp为一个重复单元。

刚才我们也提到DNA在复制过程中本身就会出现一些错误，考虑到微卫星这种串联重复序列更容易使得DNA自我复制时发生“疲劳”，出现错误的概率就更大了。

如果此时错配修复系统功能也出现异常，那么微卫星出现的复制错误得不到及时纠正并不断累积，使得微卫星序列长度或碱基组成发生改变，这种结果现象称之为微卫星不稳定性（microsatellite instability,  MSI）。

三、MSI怎么检测评估？

01.多重荧光PCR毛细管电泳法

该方法是目前公认的MSI检测“金标准”， 通常检测正常组织和肿瘤组织中MSI位点，然后通过比较确定肿瘤样本中微卫星不稳定位点数量来判断肿瘤样本的MSI状态。

国内专家共识推荐采用5 ~ 7个微卫星位点组合（BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-22、NR-24、NR-27、MONO-27）进行MSI的检测。MSI结果的判读一般遵循：2个或2个以上标记显示不稳定为MSI-H；有1个标记显示不稳定为MSI-L；所有位点都稳定为MSS。

02.高通量测序法（NGS）

随着高通量测序技术的突破发展以及日渐丰富的临床使用场景，NGS检测MSI状态也有它独特的优势，一次性可以检测评估更多微卫星序列，于此同时还可以附带其他有价值的检测结果信息。

四、MSI状态评估各方法学比较

五、dMMR不等于MSI-H

MSI与MMR关系密切, 一定程度上，dMMR ≈ MSI-H；pMMR ≈ MSS + MSI-L。但是由于MMR和MSI检测在检测主体和检测技术平台上均不相同，这又让其存在不完全相符合的问题。

六、MMR蛋白检测与MSI状态不一致的情况及对应原因

01.dMMR，但MSS

MMR蛋白缺失（MSH6蛋白），但是其功能被（MSH3蛋白）代偿，依然可以修复错配基因，但是我们IHC检测时并不包含MSH3蛋白，使得结果保持MSS；

02.pMMR，但MSI-H

MMR基因发生错义突变，MMR蛋白功能会出现异常但其抗原结构可能不会受到影响。这种情况下，IHC检测到MMR蛋白是正常表达的，即pMMR，但其实错配修复功能是异常的，这也就导致了MSI的检测结果显示为MSI-H；

由MMR基因以外的其它基因突变引起的MSI-H（比如POLE/D）。

七、MMR蛋白检测与MSI状态不一致怎么处理？

《结直肠癌及其他相关实体瘤微卫星不稳定性检测中国专家共识》指出，如果遇到患者同时进行IHC-MMR蛋白表达和DNA分析（PCR或NGS法）MSI状态检测且检测结果不一致的情况，可考虑采用第3种方法（NGS或PCR法）进行验证（部分专家推荐）。

飞朔生物MSI产品一次性检测34个MSI位点，容错率较高，为常见实体瘤免疫用药疗效评估保驾护航。

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