TRANSWELL

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matigel胶稀释比例：1：6，1：7，1：8
枪头要预冷，matrigel前一天晚上放4°成液态，用预冷的枪头无血清培养基稀释后取70~100ul加入上层小室中
细胞要铺多一点
matrigel：-20°固态，4°液态，室温凝胶状态

1. 取对数生长期的细胞，常规消化（可以无血清饥饿12~24h，去除血清对cell侵袭能力的影响）

2. 用无血清培养基重悬细胞，调整细胞密度为（2~5）*10 5/ml
   细胞要多一点
   六孔板其中一个孔消化下来后稀释6倍

3. 取100ul细胞悬液接种于transwell小室的上室，下室加入600ul含10%FBS 的培养基 （避免小室下面产生气泡）

4. 培养48h 后取出小室置烧杯内PBS涮洗 。

5. 吸干上室液体，4%多聚甲醛室温固定10~30min，
   另一24孔板中加入800ul染色液/孔
   涮洗后，吸干上室固定液，移入0.1%结晶紫染色液，室温染色20min （结晶紫：常规工作液浓度0.1%）

6. 小室用流动水轻轻冲洗浸泡3次进行脱色，烧杯内涮洗

7. 吸干上室液体，用棉签（棉花扯松一点再擦）轻轻擦掉上室底部膜表面未迁移细胞

8. 400* 显微镜下随机观察5个视野细胞，并进行照相

   

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9. 数据处理：

   

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十字线划分，4个角再拍一遍

11. 数据处理

    

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