如何选择蛋白印迹PVDF膜

PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride），是蛋白质印迹中常用的一种固相支持物。由于这种膜对蛋白质具有高亲和力，且具有较高的机械强度，因此非常适合于蛋白质转移和蛋白质印迹等应用，是蛋白分离与免疫检测的理想载体。

那如何选择PVDF膜呢？主要看两方面，一方面要关注PVDF膜的孔径大小，另一方面要关注PVDF膜的蛋白结合能力。

一、PVDF膜的孔径大小

用于蛋白质免疫印迹实验（Western Blot，WB）的PVDF膜常用规格有两种：0.22um孔径和0.45um孔径。随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20kDa的蛋白一般选用0.45um的膜，小于20kDa的蛋白则一般用0.22um的膜。由于0.22um的PVDF膜内部表面积大约是0.45μm的PVDF膜的三倍，因此其吸附能力更高。总之，研究者需要根据所研究蛋白的特性和大小来选择合适的PVDF膜孔径，以获得最佳的结合效果。

二、PVDF膜的蛋白结合能力

PVDF膜的蛋白结合能力越强，意味着蛋白质就会通过与膜接触发生的疏水作用而更加牢固的吸附在PVDF膜上。目前，像国外的Millipore、GE等公司都有蛋白结合性能不错的PVDF膜，但进口膜普遍价格偏高，很多实验室经费受限，好在现在很多国产PVDF膜也做的很不错，像BIOG的PVDF膜等等。

近期，我们实验室购入了两款PVDF膜。相同电转实验条件下，对比两个品牌的PVDF膜电转结果显示，蛋白marker的各条带均可被转到两款膜上，BIOG　PVDF膜上的条带似乎更为清晰一些；观察膜后滤纸情况发现，左图部分蛋白分子已经透过某厂家的PVDF膜转移到滤纸上，而BIOG的PVDF膜则能更好的结合蛋白分子，使其保留在膜上。以上结果说明，BIOG这款PVDF膜的蛋白结合能力更强。当然，它的机械强度与坚韧度也是比较高的、耐热稳定性也不错。如果经常做WB实验的研究者，可以尝试一下。

图1. 两款PVDF膜转膜效果比较。

另外要提醒大家，PVDF膜具有高度疏水性，因此在浸入转印缓冲液之前必须先用甲醇浸湿来进行预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。