人前列腺癌细胞(Lncap)培养注意要点

LNCaP克隆FGC是由JS Horoszewicz等人于1977年从一名50岁的白人男性（血型B +）的左锁骨上淋巴结的穿刺活检中分离出来的，该确诊为转移性前列腺癌。

该细胞不形成均一的单层而是成簇生长，所以传代的时候要反复吹打形成单个细胞；该细胞贴壁不牢，达不到汇合状态，而且会使培养基迅速变酸；传代后48h内不要扰动，一定要保持培养瓶静止。如果此时挪动培养瓶，会使大部分细胞从瓶底脱落。如果出现此种情况，需要重新孵育24~48h使细胞重新贴壁，细胞贴壁后可更换培养基。

细胞名称：人前列腺癌细胞（STR鉴定正确）

细胞简称：Lncap

产品货号：TCH-C238

种属来源：人

组织来源：前列腺

疾病特征：前列腺癌

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

配套培养基货号：TCH-G238

传代比例：1:2-1:3，每2-3天换液一次

传代周期：72-96 h

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存

质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性

Lncap细胞培养注意事项

1. 该细胞并不形成一致的单层，而是形成集落

2. 该细胞会使培养基快速变酸，且生长缓慢，故传代后 48 小时内不应扰动

3. 传代后细胞贴壁较慢，48h 内不要扰动

4. 细胞贴壁性不强，普通 TC 处理的培养瓶或皿不能使细胞很好的贴壁，培养难度较高。 建议使用 Corning 的 cellbind 细胞培养瓶，或者使用多聚-L-赖氨酸溶液对培养底面包被后进行细胞培养

5. 常温运输途中，多数细胞会从培养瓶底分离，悬浮在培养基中，请收集悬浮细胞离心 后重新接种。

6. 收货后，如果发现细胞漂浮或成团，可按下面的步骤进行处理：

（1）将培养瓶内的所有培养基，转入无菌离心管，离心收集细胞（1200rpm 3min）；

（2）去掉上清，用PBS重悬细胞，将细胞收集到一个离心管中，PBS震动离心管混匀即可，再次离心（1200rpm 3min）；

（3）去掉上清，加入1ml左右0.25%胰酶，重悬混匀细胞。震动离心管，混匀即可，不能吹打。放入培养箱，消化细胞，消化时间3分钟左右；

（4）消化完毕后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散。加入5ml含血清的培养基，混匀后终止消化，离心（1200rpm 3min）；

（5）去掉上清，加入5-7ml相应完全培养基混匀，轻轻/反复吹打细胞，接种于无菌T25瓶中（接种容器应提前用对应培养基浸润）。