琼脂糖凝胶电泳技术的实验步骤是什么？

(1)制备琼脂糖凝胶：检查凝胶模具是否完好，选择加样孔径大小适宜的梳板，垂直架在 模具的一端，使梳板底部离模具水平面的距离为1.0mm左右。按照被分离的DNA分子的大小决 定凝胶中琼脂糖的百分含量。

(2)称取一定量的琼脂糖，溶解在×1 TAE电泳缓冲液中，置微波炉中加热至琼脂糖溶化均匀(如果配制浓度为1%的琼脂糖凝胶：如体积为100ml,则需要称量琼脂糖粉末1g)。

(3)在凝胶中加入溴化乙啶(终浓度为0.5μg/ml), 轻摇混匀，待凝胶溶液冷却至50℃左右 时，轻轻倒入制胶模具中，凝胶厚度一般为0.3~0.5cm。若有气泡，及时去除。于室温下冷却凝固。

(4)凝胶冷却凝固30分钟后，将模具与凝胶一起放入电泳槽内。在电泳槽内加入×1 TAE 电泳缓冲液，至没过胶面，小心取出梳板，注意保持点样孔的完好。

(5)待测的DNA样品与1/5体积的上样缓冲液混匀后点样，进行琼脂糖凝胶电泳，记录样品 次序与上样量，在样品的一侧的点样孔中加入分子量标准。

(6)打开电源开关，选择适当的电压进行电泳，最高电压不高于5V/cm,当琼脂糖浓度低于 0.5%时，电泳时温度不能太高。电泳时间据实验具体要求而定，一般电泳30~60分钟即可。

(7)电泳至溴酚蓝指示剂接近凝胶尾端，停止电泳。

电泳结束后，取出凝胶直接在紫外透射仪上观察及分析结果，观察DNA 条带是否 清晰，有无拖尾，对照DNA ladder判断条带分子量大小。