免疫组织化学（IHC）实验样本制备步骤详解

免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）。

取材

1. 实验前准备好手术刀、手术剪、镊子、解剖盘、组织滤纸、10%中性福尔马林固定液、70%～95%乙醇、石蜡等。

2. 取材时，用手术刀轻轻剥离取出组织，放入10%中性福尔马林固定液中固定，固定液量应为组织体积的5～10倍，组织块不宜过大，一般1.5cm×1.5cm×0.3cm。

3. 固定液的量要足够，确保组织在其中能充分固定，固定时间一般在18～24h。

固定

1. 组织取材后，要立即放入固定液中进行固定，以防止组织自溶与腐败。

2. 常用的固定液有10%的甲醛（福尔马林）、酒精、醋酸酒精等。

3. 本实验采用10%的中性福尔马林固定液，将组织块放入其中进行固定。

4. 固定液的量应为组织体积的5～10倍，固定时间一般在18～24h，以使组织充分固定。

脱水

1. 组织经过固定后需要进行脱水，以去除组织中的水分。

2. 常用的脱水剂有酒精、二甲苯等。本实验采用70%～95%的酒精进行脱水。

3. 将固定好的组织取出，放入70%～95%的酒精中进行脱水，每隔一段时间更换一次酒精，直至组织不再发白为止。

4. 脱水的时间一般在30min～2h之间，具体时间根据组织的性质和大小而定。

包埋

1. 脱水后的组织需要进行包埋，以使其能够耐受切片过程中的机械作用力。

2. 常用的包埋剂有石蜡、树脂等。本实验采用石蜡作为包埋剂。

3. 将脱水后的组织取出，放入熔化的石蜡中进行包埋。

切片

1.使用旋转式或滑动式切片机将蜡块中的组织切成非常薄的切片（通常为4-6微米）。

2.切片过程需要非常小心，以确保切得均匀且不损坏组织。

3.切片后，将切片放置在载玻片上。

脱蜡

1.将载玻片上的切片置于脱蜡剂中，以去除蜡块并使切片恢复水合状态。

2.脱蜡过程通常涉及将载玻片在不同浓度的酒精中逐渐脱蜡，然后在水中进行最后的水合。

组织包埋机

       主要用于动植物标本经脱水浸蜡后进行组织蜡块包埋，以供切片后作组织学诊断或研究。本产品由主机+冷台+热台三部分组成，具有5个温控系统，其中蜡缸、蜡嘴、工作台、保存缸和储镊块温度控制在室温-99℃范围内任意可调，冷台温度可控，容积6L，一次可满足400个组织同时包埋。

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