如何从细胞中提取总蛋白？

(1)细胞的蛋白质抽提步骤：

1)从-20℃取出配制好的RIPA裂解液，冰上放置融解，混匀，瞬时离心；

2)配制含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液。

3)贴壁细胞的裂解：

①从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。

②预冷的PBS清洗贴壁的细胞2次，小心倾去PBS。

③细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的RIPA裂解液(107个细胞中加入1ml抽提试剂；5×10⁶个细胞中加入0.5ml抽提试剂),轻摇混匀，使裂解液与细胞充分接触，冰上裂解5分钟。

④用预冷的细胞刮铲和移液器将裂解产物与细胞碎片一起转移至1.5ml离心管中，冰上放 置30分钟，每10分钟震荡一次，每次震荡1分钟。

⑤4℃,14000rpm 离心15分钟。离心后上清液立刻转入新的离心管中，于-80℃保存。

4)悬浮细胞的裂解：

①1000rpm离心5分钟，收集细胞于离心管中。

②加入预冷PBS清洗细胞2~3次，1000rpm离心5分钟，收集细胞。

③根据细胞数量加入适量的RIPA裂解液，用吸管吹打将细胞打散，上下颠倒数次以充分 裂解细胞。

④冰上放置30分钟，每10分钟震荡一次，每次震荡1分钟。

⑤4℃,14000rpm 离心15分钟。离心后上清液立刻转入新的离心管中，-80℃保存。