Raw264.7细胞极化了怎么处理？

Raw 264.7细胞是从Abelson小鼠白血病病毒诱导的肿瘤中建立的雄性小鼠巨噬细胞细胞系。未经诱导分化的Raw264.7细胞形态主要为圆形或短梭形。因其对环境非常敏感，可能会出现一部分多角形的自发极化细胞。那怎么把圆形的未分化细胞和这些极化细胞分开呢？

▲部分细胞发生极化

极化的细胞贴壁较紧，而未极化的细胞贴壁松。所以通过移液器吹打细胞，将可以吹落的细胞转移到新的培养皿/瓶中，培养1-2天后再次进行吹打，经过几轮筛选，可以将极化细胞控制在较低的范围内。

吹打步骤：

1. 将培养瓶或培养皿中大部分培养基吸走，留2-3mL培养基在原瓶中。

2. 用1mL吸头吹打细胞生长面，将细胞吹下。耐心吹打，注意不要吹出泡沫。

3. 转移至离心管，900rpm离心3min收集细胞沉淀，弃上清。

加新鲜培养基轻轻重悬细胞，接种到新的培养皿/瓶。

注意事项：

密度较低时，极化细胞比例可能较高。但随着培养，圆形的未极化细胞会越来越多，密度较大时更容易吹打，因此培养至90%密度左右进行吹打更好。

Raw264.7细胞生长较快，应该提供足量的培养基（T25/10cm皿不低于8mL），避免营养不足导致细胞状态变差。

如果能吹下的细胞非常少，则转移到小皿或孔板进行培养，避免细胞密度过低导致细胞不生长。待细胞长起来后再传到大皿中进行扩增。

长期不传代，细胞贴壁逐渐变紧，推荐每1-2天传代1次。

Raw264.7细胞对血清质量非常敏感，建议使用高质量的胎牛血清。

因为Raw264.7细胞对环境极其敏感，所以很难维持100%未极化的状态，通常将极化细胞控制在较低范围即可。