细胞“罢工”?!细胞传代后增殖缓慢之谜!

养箱里,我们的“小劳模”细胞们每天忙着分裂增殖,为我们的实验贡献着力量。然而,有时候,这些小家伙们却会突然“罢工”,传代后的增殖速度变得慢如蜗牛,仿佛一夜之间爱上了慢生活。这背后究竟是什么原因呢?怎样才能让细胞们恢复干劲呢?请看下文~

1接种密度低

你知道吗?很多细胞都有密度依赖。细胞自身会分泌一些因子到培养基中促进周围的细胞生长(旁分泌)。细胞密度太低,这种化学信号的传递减弱,细胞状态受到影响。接种密度越低,增殖越慢,甚至不增殖。

解决方案:

根据细胞生长速度确定合适的传代比例和接种密度。如果细胞已经传稀了,可以耐心继续培养,或将细胞重新传到更小的器皿中,增加密度。特别提醒!T25培养瓶底面积为25cm2,10cm培养皿底面积是55cm2,所以一个T25传两个10cm皿约等于1:4传代,而不是1:2

2培养基、血清不合适

想象一下,你突然来到一个全新的城市上学上班,面对全新的环境,是不是也需要适应一段时间呢?细胞突然被换到新的培养基和血清中,也会出现水土不服的情况,特别是对血清要求高的细胞。新的培养基或血清不对细胞胃口时,导致它们“食欲不振”,生长速度自然就慢了下来。

解决方案:

检查新培养基和原培养基的配方是否有差异,是否需要额外添加试剂,成分尽量保持一致。新培养基和原培养基混合培养1-2代,让细胞慢慢适应,如果细胞正常生长,再完全替换为新的培养基。如果它们实在适应不了新培养基,还是换回原培养基,毕竟实验不等人啊!另外,记得定期换液,别等培养基都变成金黄色了才换,这无异于把细胞活活饿死!

3细胞受损

在细胞传代的过程中,如果发生一些“工伤”事故,比如胰酶消化时间过长,导致它们受伤;消化时间过短,细胞们还没完全分开,就被强行“搬家”了,导致细胞膜受损;重悬时疯狂吹打,生怕吹不均匀,结果把细胞打得半死不活,都会导致细胞增殖速度变慢。

解决方案:

传代时严格控制胰酶消化时间,控制吹打次数和力道。如果细胞已经受损了,传代后漂浮细胞和碎片很多,可以尝试提高血清浓度(总量不超过20%),帮助它们恢复元气。如果伤情严重,抢救失败,那还是重新复苏吧!

4细胞衰老

原代细胞以及一些有限传代的细胞系,随着传代次数增多,细胞生长速度逐渐减慢,最终停止增殖。

解决方案:

细胞衰老是自然法则无法避免,但我们可以通过优化培养条件和操作,让细胞尽可能保持好的状态,并及时进行实验。对于有限细胞系,要记得冻存早期代次作为备份。对于原代细胞,则要规范提取步骤,保证细胞质量稳定,实验重复性才能更好。

♥虽然细胞不增殖的时候我们心急如焚,但也让我们更加深入了解自己细胞的特性。通过不断探索和实践,当我们找到了最适合的培养方案,细胞们会更加健康、快乐地生长着。祝各位同学和自己的细胞们相处愉快!

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作者:lichengxin
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来源:TechFM
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