关于消除生物样品自体荧光，您了解哪些？

目前，市面上关于实验中消除生物样品自体荧光的使用方法有很多，比如化学交联固定诱导的自发荧光、图像处理技术、光谱扫描和荧光团选择 、使用新型荧光探针等，那关于自体荧光您了解哪些？

什么是自体荧光？

生物体内的一些内源性物质（天然存在的分子）在没有添加外来荧光染料的情况下，受到特定波长的光激发后，自身能发出荧光的现象。

自体荧光的信号通常来源：

01 脂褐素：是细胞内的一种脂质和蛋白质的氧化聚合产物，常见于衰老细胞。其荧光强度可以作为细胞衰老程度的一个标志。

02 弹性纤维：主要存在于有弹性的组织中，像皮肤、血管、肺部等组织中，增强组织的弹性和韧性。

03 维生素A：本身一般没有自体荧光，但在固定或免疫荧光染色时，会与其它物质相互作用，产生干扰荧光成像的信号。

04 NADH：细胞呼吸过程中的关键辅酶，参与细胞的能量代谢。如神经元、心肌细胞、肝细胞等需要高能量的细胞。

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自体荧光有哪些影响？

在实际应用中，自体荧光现象会干扰目标荧光信号的观察，对实验带来一些影响：

01 影响成像：自体荧光会增加背景噪声，这可能会掩盖微弱的信号，降低实验的信噪比。

02 非特异性染色：在组织免疫荧光等实验中，自体荧光可能导致非特异性染色，影响对实验结果的准确解释。

03 通道干扰：在多色流式细胞术等实验中，自体荧光可能会在不同通道间产生干扰，使得数据分析复杂化。

04 样品制备问题：塑料容器、培养基添加剂、纸质标签等实验室常用物品也可能产生自体荧光，这些都需要在实验设计时予以考虑。

05固定和染色过程：使用醛类固定剂或某些染料可能增加样品的自体荧光。

常见的荧光淬灭方法

1.荧光淬灭试剂

◎常用的减少自体荧光的方法

◎缺点：

1.会减弱实验中原本想要检测的荧光染料的信号。这意味着，虽然自体荧光被减少，但目标信号也可能受损。

2.会引入非特异性背景荧光，即在其它荧光波长处增加噪声，而干扰目标信号的检测和分析。

3.只适合单一免疫荧光染色

4.只适合已经固定在载玻片上的组织切片

2.强光照射（LED/UV）

◎不使用化学试剂的自体荧光淬灭方法

◎缺点：

1.淬灭效率低。需要长时间照射（几个小时到几天）才能完成所有载玻片上组织的自体荧光淬灭。

2.组织会因长时间光照射导致高水平的热损伤，影响样品的生物结构和功能，从而影响实验结果的准确性。