大鼠皮质酮（CORT）ELISA 试剂盒：科研检测详尽指南

在科研探索的征程中，准确测定大鼠皮质酮；肾上腺酮（CORT）的含量，对深入了解大鼠生理病理机制意义重大。大鼠皮质酮；肾上腺酮（CORT）定量检测试剂盒（ELISA），为科研人员提供了可靠的检测工具。在使用前，深入了解其各项信息是确保实验顺利、结果准确的关键。

一、实验原理：竞争 ELISA 法的巧妙运用

本试剂盒采用竞争 ELISA 法。预先包被皮质酮；肾上腺酮（CORT）抗体的微孔板，如同搭建好的 “舞台”。实验时，依次加入样本 / 校准品和 Asaay Diluent，经过温育洗涤，让样本中的 CORT 与包被抗体充分 “互动”。再加入 SA - HRP 温育，进一步构建反应体系。再次洗涤后，加入底物 TMB 显色。在这一过程中，室温显色并用终止液终止反应后，通过读取 OD 值来判断 CORT 的含量。值得注意的是，OD 值高低和样品中的皮质酮；肾上腺酮（CORT）呈负相关，这一特性使得检测结果清晰明了。凭借这一原理，试剂盒具备了灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简单、快速等优点，能够可靠地检测出血清中 CORT 的变化。

二、试剂盒限制性：明确使用边界

为保证实验科学性与准确性，试剂盒有明确的使用限制。其一，仅供科研使用，严禁用于临床诊断。其二，需在有效期内使用，过期产品切勿使用。其三，不能与其他厂家的试剂盒或组分混用。其四，若样品需稀释，可用 PBS（PH7.4）。其五，样本值高于最高标准品浓度时，需适当稀释后重测。其六，要排除待测样本中可能干扰检测的异嗜抗体。其七，其他方法的检测结果与本试剂盒结果不具直接可比性。

三、技术提示：注重细节保障结果

使用试剂盒过程中，诸多技术细节不容忽视。混合蛋白溶液避免起泡，加样时校准品和样本都要换移液枪头，公共组分悬臂加样防交叉污染。合适温育时间和充分洗涤步骤是关键，自动洗板机加 30 秒浸泡可提高精度。底物溶液变色即失效，终止液加样顺序与底物一致。用剩板条及时密封保存，所有液体组分使用前充分摇匀，严格按说明书操作。

四、试剂盒组分与保存：妥善管理确保性能

未开封试剂盒需保存在 2 - 8 度。试剂盒包含多种组分，校准品为 0.5ml / 管 * 6 管，浓度依次为 16、8、4、2、1、0ng/mL，如同 “测量标尺” 为结果提供参照。包被微孔板有 96T/48T 规格，预包被固相抗体。SA - HRP、Asaay Diluent、TMB、终止液、20× 浓缩洗涤液等各有作用，还有说明书、自封袋、不干胶等辅助物品。

五、其他用品：完备准备助力实验

进行实验还需多种用品。酶标仪（450nm）用于读取数据，精密移液器及一次性吸头保证加样准确，蒸馏水、洗瓶或自动洗板机用于清洗，37℃水浴锅或恒温箱提供温育环境，500ml 量筒用于相关液体量取。

六、生物安全：严格规范保障安全

生物安全是实验的重要考量。检测要符合实验室规范，防止交叉污染，所有样品、废弃物按传染物处置。试剂盒液体含 proclin - 300 防腐剂，可能过敏，避免接触；底物液有刺激性，防止吸入。实验时戴手套，结束后彻底洗手。

七、样品的采集和储存：规范操作保证质量

不同类型样品采集和储存方法各异。细胞培养上清在 4000rpm 离心 20min，上清液 20℃以下保存且避免冻融；血清用无热原和内毒素试管，4000rpm 离心 20min， - 20℃以下保存；血浆用肝素等抗凝，4000rpm 离心 20min， - 20℃以下保存；组织用预冷 PBS 冲洗、剪碎，按比例与含蛋白酶抑制剂的 PBS 研磨，匀浆液 5000×g 离心 5 - 10 分钟取上清。样本在 2 - 8℃可存 72h， - 20℃可存 6 个月，非一次检测完需分装冻存，使用时室温解冻。

八、检验方法操作程序：严谨流程确保准确

实验操作需严格按步骤执行。先将试剂移至室温平衡两小时，稀释浓缩洗涤液备用。取出预包被板，设空白对照孔，校准品每浓度设 2 孔，每孔加 15μl，检测孔加 15μl 待测样本。除空白孔外加 Asaay Diluent 100μl，37℃温育 60 分钟后洗板。再每孔加 SA - HRP 100μl，37℃温育 30 分钟后再次洗板。然后加 TMB 100μl，37℃避光显色 15 分钟，加终止液 100μl，用酶标仪在 450nm 波长读取 OD 值。

九、结果计算：科学方法得出精准结果

检测完成后，以标准品浓度为纵坐标，吸光度（OD 值）为横坐标，利用计算机软件采用四参数 Logistic 曲线拟合（4 - pl）创建标准曲线方程。通过样本吸光度，利用方程计算浓度值，若样品稀释，最终浓度需乘以稀释倍数。

十、试剂盒性能指标：卓越品质值得信赖

试剂盒性能卓越。物理性能上，液体组分澄清无沉淀，包装无破损，装量达标。剂量反应曲线线性良好，相关系数绝对值不低于 0.9900。精密度方面，批内、批间变异系数均小于 15%。灵敏度高，最低检出限不高于 0.1ng/mL。回收率在 85% - 115% 之间，2℃ - 8℃保存有效期 6 个月，检测范围为 1 ng/mL – 16 ng/mL。
大鼠皮质酮；肾上腺酮（CORT）定量检测试剂盒（ELISA）以其科学的原理、严格的规范和可靠的性能，为科研工作提供了有力支持，是科研人员检测大鼠 CORT 含量的得力助手 。