优品生物小鼠抗双链DNA抗体检测试剂盒操作说明

实验原理

优品生物的小鼠抗双链DNA抗体(dsDNA-Ab)检测试剂盒采用酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，通过特异性抗体与抗原结合，利用酶标记的二抗催化显色反应，从而定量检测样本中的dsDNA-Ab水平。该方法具有高灵敏度和高特异性，适用于小鼠血清、血浆等样本的检测。

试剂盒组成

1. 预包被微孔板：已包被双链DNA抗原的96孔酶标板。
2. 标准品：用于建立标准曲线的dsDNA-Ab标准品。
3. 检测抗体：HRP标记的二抗，用于信号放大。
4. 样本稀释液：用于稀释样本。
5. 洗涤液：用于清洗微孔板。
6. 显色底物液：TMB显色底物。
7. 终止液：稀释的硫酸溶液。
8. 说明书：详细的操作步骤和注意事项。

操作步骤

1. 样本准备：
   1. 收集小鼠血清或血浆样本，确保样本无溶血、无污染。
   2. 如样本无法立即检测，可于-20℃保存，避免反复冻融。
2. 试剂准备：
   1. 将所有试剂平衡至室温（约20-25℃）。
   2. 按1:10比例稀释20×浓缩洗涤液。
3. 加样：
   1. 标记酶标板孔位，标准品和样本均做双孔平行实验。
   2. 向标准孔加入100μL浓度梯度标准品，向样本孔加入100μL稀释好的样本。
4. 孵育：
   1. 室温孵育60分钟，确保抗体与抗原充分结合。
5. 洗板：
   1. 每孔加入200μL洗涤液，静置10-20秒后倾倒，重复4-5次，轻拍酶标板去除残余液体。
6. 加入检测抗体：
   1. 每孔加入100μL HRP标记的检测抗体，室温孵育60分钟。
7. 重复洗板：
   1. 按照步骤5重复洗涤，确保孔内清洁，减少背景干扰。
8. 显色反应：
   1. 每孔加入100μL TMB显色液，避光静置10-15分钟，观察颜色变化。
9. 终止反应：
   1. 每孔加入50μL终止液，快速轻拍混匀，颜色由蓝变黄。
10. 数据读取：
    1. 使用酶标仪在450nm波长下读取吸光值。
       

数据分析

1. 根据标准品的OD值绘制标准曲线（浓度-OD450值）。
2. 根据样本的OD值，通过标准曲线计算出抗dsDNA抗体的实际浓度。
3. 若样本浓度超出标准曲线范围，需进行适当稀释后重新检测。

注意事项

1. 样本处理：确保样本无溶血、无污染，避免反复冻融。
2. 试剂准备：所有试剂使用前需平衡至室温，避免因温度差异影响实验结果。
3. 孵育条件：严格按照说明书要求进行孵育，避免时间或温度偏差。
4. 洗板操作：洗板时需轻拍酶标板，避免用力过猛导致孔内液体溅出。
5. 显色时间：显色反应时间需严格控制，避免显色过度或不足。
6. 技术支持：实验过程中如有任何疑问或技术问题，请及时联系优品生物的技术支持团队。

通过以上详细的操作步骤，您可以准确、高效地完成小鼠抗双链DNA抗体(dsDNA-Ab)的检测，为科研工作提供可靠的数据支持。