一种新型自组装免疫刺激siRNA结合凋亡促进和RIG-I激活对胶质瘤的治疗效果

标题：Therapeutic efficacy of a novel self-assembled immunostimulatory siRNA combining apoptosis promotion with RIG-I activation in gliomas  一种新型自组装免疫刺激siRNA结合凋亡促进和RIG-I激活对胶质瘤的治疗效果

背景：当前癌症疗法在解决恶性肿瘤的复杂性方面往往不足，这突出了创新治疗策略的迫切需要。特异性抑制基因表达的RNA干扰技术为对抗肿瘤提供了一种有前景的新方法。最近的研究发现了一种新型的免疫刺激性小干扰RNA（siRNA），其具有独特的序列（有义链，5′-C；反义链，3′-GGG），能够激活RIG-I/IRF3信号通路。这种激活诱导I型和III型干扰素的释放，导致有效的抗病毒免疫反应。然而，这类免疫刺激siRNA尚未在癌症治疗中得到探索。

方法：IsiBCL-2是一种创新的免疫刺激siRNA，旨在抑制B细胞淋巴瘤2（BCL-2）的水平，含有一种独特的基序（有义链，5′-C；反义链，3′-GGG）。胶质母细胞瘤细胞在体外接受100 nM isiBCL-2处理48小时。评估形态学变化、细胞存活率（CCK-8测定）、增殖（集落形成测定）、迁移/侵袭（划痕试验和Transwell测定）、凋亡率、活性氧（ROS）和线粒体膜电位（MMP）。进行蛋白质印迹和免疫荧光分析以评估RIG-I和MHC-I分子水平，并利用ELISA测量细胞因子（IFN-β和CXCL10）的水平。建立体内异质性肿瘤模型，通过瘤内注射证实isiBCL-2的抗肿瘤作用。

结果：IsiBCL-2对胶质母细胞瘤细胞生长具有显著的抑制作用，并诱导其凋亡。BCL-2 mRNA水平显著降低了67.52%。IsiBCL-2治疗导致约51.96%的凋亡率，同时MMP减少71.76%，ROS积累增加41.87%。蛋白质印迹和免疫荧光分析表明，isiBCL-2治疗后RIG-I、MAVS和MHC-I水平升高。ELISA检测表明IFN-β和CXCL10水平显著升高。使用裸小鼠的体内研究证实，isiBCL-2有效地阻碍了胶质母细胞瘤肿瘤的生长和进展。

结论：本研究介绍了一种创新的方法，通过将免疫刺激序列（有义链，5′-C；反义链，3′-GGG）结合到siRNA中来诱导先天信号传导，通过Hoogsteen碱基配对形成RNA二聚体。这种激活会触发肿瘤细胞中的RIG-I信号通路，造成进一步的损伤并诱导强烈的免疫反应。这种免疫刺激siRNA的创造性设计和应用为肿瘤免疫治疗提供了新的视角，对该领域具有重要意义。

其中体内RNA转染采用EntransterTM-in vivo RNA来实现。