RFect Prime–完美平替 lipo3000 的国产试剂

在细胞生物学研究领域，DNA和 siRNA 转染实验是深入探究细胞功能、基因表达调控机制等关键科学问题的重要技术手段。由于 DNA 和 siRNA 在分子大小、电荷特性及分子构型上存在显著差异，从专业实验设计角度出发，分别选用专门的转染试剂进行 DNA 和 siRNA 转染，往往能获得更为理想的实验效果。然而，在实际研究过程中，部分科研工作者面临着将两者同时或先后导入细胞的实验需求；同时，一些研究团队受限于科研经费预算，期望能找到一款可同时高效转染 DNA 和 siRNA 的通用型转染试剂。

目前，市面上能够满足上述要求的转染试剂相对稀缺。其中，Lipofectamine 3000（简称 Lipo3000）作为国际公认的权威品牌，在 DNA 和 siRNA 转染方面均表现出较高的性能，被广泛应用于各类细胞转染实验。而 RFect Prime 作为一款由海归科学家团队研发、拥有自主核心知识产权的国产品牌转染试剂，采用可降解生物纳米材料配制而成，近年来在科研领域逐渐崭露头角。本研究旨在从转染性能、细胞毒性以及操作简便性三个关键维度，对 RFect Prime 和Lipo3000 进行系统比较与分析。

一、转染性能

转染效率是评估转染试剂性能的核心指标，一款理想的转染试剂应在普通细胞株及难转染细胞中均展现出较高的转染活性，为科研工作提供稳定可靠的技术支持。

（一）普通细胞株中的转染效果

HeLa细胞作为实验室常用的宫颈癌细胞株，因其具有无限增殖特性，常被用于肿瘤学研究、细胞转染技术优化等实验场景，在转染试剂性能验证实验中，也常被作为质量控制的标准细胞系。在本次实验中，我们分别采用RFect Prime和 Lipo3000 将 Cy3 标记的 siRNA 转染至 HeLa 细胞，转染 24 小时后，利用荧光显微镜对转染效率进行观察与分析。实验结果显示，两款转染试剂对 siRNA 的转染阳性率均超过 90%（图 A、图 B）。

在DNA转染性能对比实验中，我们选取了常用于病毒包装和重组蛋白表达的AAV - 293工程细胞。将 GFP 质粒分别通过 RFect Prime 和 Lipo3000 转染至 AAV - 293 细胞，转染 48 小时后观察转染效率。结果表明，RFect Prime 和 Lipo3000 在 AAV - 293 细胞中的转染阳性率相近，均高于 90%（图 C、图 D）。值得注意的是，经 RFect Prime 转染的细胞荧光强度似乎更强，这一现象暗示了 RFect Prime 在 DNA 转染过程中，可能促进了 GFP 质粒的表达效率。

（二）难转染原代细胞中的转染表现

原代细胞直接从机体组织分离培养，其细胞膜相对较厚，且表面存在大量微绒毛和微细突起，这些特殊的细胞结构会阻碍转染试剂与细胞膜的有效结合，进而降低转染效率。此外，原代细胞对环境毒性更为敏感，在转染实验过程中，细胞死亡率通常显著高于普通细胞株，使得原代细胞的转染成为细胞生物学实验中的一大挑战。

为进一步探究RFect Prime和 Lipo3000 在难转染细胞中的转染能力，我们将siRNA和质粒 DNA 分别导入原代肺癌细胞，并在转染后 24 小时及 48 小时观察转染结果。实验过程中发现，使用 Lipo3000 转染的原代肺癌细胞实验组细胞死亡率较高，毒性作用较为明显。因此，本研究主要针对 RFect Prime 的转染结果进行详细分析。荧光成像结果显示，RFect Prime 对原代肺癌细胞中质粒的转染阳性率可达 85%，对 siRNA 的转染阳性率可达 90%（图 E、图 F）。这一结果表明，RFect Prime 在难转染的原代细胞中展现出了良好的转染性能，为难转染细胞相关研究提供了新的技术选择。

二、细胞毒性

细胞毒性是评估转染试剂适用性的重要指标之一，过高的细胞毒性可能导致细胞生理状态改变，干扰实验结果的准确性。为比较RFect Prime和 Lipo3000 的细胞毒性差异，研究人员以原代大鼠主动脉平滑肌细胞为实验对象，进行了小核酸 NC - FAM 转染实验。

实验结果显示，经RFect Prime转染后的细胞死亡率约为 5%，与空白对照组细胞死亡率几乎一致。这表明 RFect Prime 的细胞毒性极低，推测其原因可能与该试剂主要成分为可降解生物材料有关，这类材料在细胞内能够缓慢降解，减少对细胞正常生理功能的干扰。相比之下，使用 Lipo3000 进行转染的细胞死亡率约为 10%，略高于 RFect Prime 转染组。总体而言，两款转染试剂的细胞毒性均处于较低水平，但对于对毒性较为敏感的细胞株或原代细胞，RFect Prime 在转染实验中的应用可能更具优势。

三、操作简便性

转染试剂的操作流程复杂程度直接影响实验效率与重复性，操作简便性主要体现在实验过程中是否需要频繁更换培养基以及是否需要额外购买配套试剂两个方面。

在制备转染复合物时，使用RFect Prime仅需加入实验室常规配备的 1640 或 DMEM 培养基即可，无需购买其他额外试剂，有效降低了实验成本与操作复杂度。而使用 Lipo3000 时，则需要添加 Opti - MEM™ I 减血清培养基，该培养基需另行购买，增加了实验成本与准备工作。

在换液操作方面，使用RFect Prime转染时，将转染复合物加入细胞培养孔 6 小时后，细胞生长状态良好，无需进行换液操作，这可能与 RFect Prime 较低的细胞毒性有关，减少了因换液操作对细胞造成的物理性损伤和环境变化应激。而使用 Lipo3000 转染时，在转染复合物加入细胞培养孔 6 小时左右，通常建议更换新鲜培养基，以保证细胞的正常生长环境，这无疑增加了实验操作步骤与时间成本。

综上所述，RFect Prime在 DNA 和 siRNA 转染性能方面表现优异，与国际知名品牌 Lipo3000 相当；在细胞毒性方面，RFect Prime 具有更低的细胞毒性，尤其适用于对毒性敏感的细胞株和原代细胞转染实验；在操作简便性上，RFect Prime 无需额外购买特殊试剂，且换液操作简单，为科研工作者节省了时间与成本。因此，RFect Prime 是一款极具应用潜力的转染试剂，可完美平替lipo3000，有望成为科研工作者在细胞转染实验中的理想选择。