相对定量方法
以参照基因作为标准进行相对定量
用参照基因(β-actin等)的优点是能准确量化初始材料的载量,进行相对基因表达分析实验十分方便。在其他所有样本中目标基因的表达都相对于参照基因上调或下调。
常用的内参基因:GAPDH 、β-actin 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP等
2-△△CT(Livak)方法
条件:目标基因和参照基因扩增效率都接近100%且相互间效率偏差在5%以内。使用这个方法之前,必须检验目标基因和参照基因的扩增效率。
如何判断扩增效率一致:
同时扩增目的基因和内参甚因,通过查看扩增曲线中指数增长期是否平行来确定扩增效率是否相似
(1)对所有的测试样本和校准样本,用内参基因的CT值归一目标基因的CT值:
(2)用校准样本的△CT值归一试验样本的△CT值:
(3)计算表达水平比率:
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