外泌体—干货

一、外泌体的基本概念

      外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。

　　所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。

二、外泌体发展史

1983年，外泌体于绵羊网织红细胞中被发现。 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。

1996年发现B淋巴细胞能分泌抗原提量外泌体并可以刺激CD4+细胞的抗肿瘤反应。

1998年树突细胞(DCcell)被发现能产生抗原提呈的外泌体。

2010年H.Valadi等发现，细胞之间可以通过外泌体中的RNA来交换物质，外泌体几平存在于所有组织细胞及体液中。

2013年美国科学家Jamesh和Randy.德国科学家Thomas发现细胞外泌体运输调控机制，使得外泌体研究达到新的高度，获得了2013年诺贝医学奖。

三、外泌体功能

①细胞增值与凋亡调控

②转移与侵袭

③血管生成

④免疫应答

⑤细胞分化

⑥代谢调控

⑦微生物组调控

⑧病毒感染

四、外泌体的研究应用

1.载体药物研究：外泌体可作为载体将包裹在内的药物运送到目标区域，做到靶向治疗；

2.诊断研究：主要研究外泌体的种类、数目、大小和内容物与疾病之间的关系；来预测疾病的发生与进展（如阿尔茨海默病）

3.间充质干细胞外泌体改造：间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞有着相似的功能，间充质干细胞来源外泌体更稳定，更好保存，易于管理和控制，可以人为改变其内容物的种类和数量；

4.外泌体biomarker:外泌体内容物分析转录组测序、芯片（mRNA,LncRNA,miRNA,cir RNA)、蛋白质组、代谢组分析。

五、外泌体的提取主要方式

李记生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒，经过优化处理，适用于细胞培养上清液（尿液等）中的外泌体提取，并搭配纯化过滤装置，可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒, 可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

      1）是超速离心法，这是目前外泌体提取常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。

       2）是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。

　　3）是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。

　　4）是免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验。

　　5）是PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。

　　6）是色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不广泛。