干货锦囊|质谱流式抗体选择小妙招

质谱流式细胞术通常被认为是基于荧光流式细胞术的改良技术，其用不同重金属稳定同位素（图1）代替荧光基团来标记不同抗体。然后将单个细胞雾化电离，仅保留与相应抗体一一对应的金属离子信息。最后用TOF探测器对单个细胞的离子云进行分析，还原其细胞marker信息。

图1 质谱流式（CyTOF）——你熟悉的流式细胞术Plus

您是否对质谱流式抗体选择感到困惑？

在科研领域中，抗体的选择至关重要，尤其是在流式细胞术/质谱流式技术中。质谱流式技术结合了质谱和流式细胞术的优势，为我们提供了在细胞层面深入研究细胞蛋白质组的能力。然而，正确选择适用的抗体对于实验结果的准确性至关重要。

在本文中，我们将分享一些关于质谱流式抗体选择的小妙招，帮助您在研究中取得更可靠、更精确的数据。

1. BSA free

一般情况下，溶解抗体的PBS 缓冲液通常含有牛血清白蛋白(BSA)、甘油、叠氮化钠。其中蛋白质稳定剂BSA能防止抗体降解，减少非特异性结合。但BSA会干扰利用金属稳定同位素标签（图 2）标记抗体时所用还原剂的效果，且BSA可能与目标抗竞争性结合金属稳定同位素标签，以至大幅度降低金属稳定同位素与抗体的偶联效率。并且干扰后续标记效率检测的电泳结果。

图2 质谱流式（CyTOF）广泛应用金属稳定同位素标签

2. 单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAb）

存在于抗原表面的，决定抗原特异性的特殊化学基团称为抗原决定簇，又称抗原表位。一个抗原可以有一种或多种不同的抗原表位，每种表位只有一种抗原特异性。

多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）：由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体。

单克隆抗体：由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原刺激所产生的抗体称之为单克隆抗体。

质谱流式应选择单克隆抗体进行试验，其特异性地检测单个表位，不易与其它蛋白质发生交叉反应。可以高效结合抗原，提升实验结果的一致性和标准化水平。

3. 抗体类型——IgG

用于质谱流式的抗体应具有以下特征：

易获取，较稳定：根据重链可将免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)分为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE五类。其中，IgG的分子量小且半衰期长，分解比较慢，所以是血清中含量最多的免疫球蛋白(占Ig量的75%)。

易于设置同型对照：质谱流式、流式细胞实验有必要选择与待测抗体Panel同种属来源,同亚型,同金属同位素标记的抗体用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色,相当于实验的阴性对照。

4. 非同种属来源抗体

为了降低非特异性结合，应用于质谱流式的抗体应选取与反应物种非同物种来源的抗体。例如，检测人相关蛋白时应选取非人（鼠源，兔源，羊源等）物种来源的抗体。

5. 抗体规格——100 μg

此规格为金属同位素标记抗体的标记效率和回收得率良好的一般抗体规格。

6. 应用

质谱流式的抗体应优先选用已经在流式细胞术得到验证的抗体。

7. 标记

质谱流式的抗体应选择没有任何标记的裸抗。

质谱流式(Mass Cytometry)细胞仪是跨时代的高通量流式细胞仪，可在单次实验中获得40余种蛋白的表达信息。不仅仅是细胞表面Marker,还可以获得胞内蛋白，例如蛋白磷酸化通路和代谢相关的信息。质谱流式利用飞行时间质谱(TOF)作为检测手段，具有检出限低、动态线性范围广(ng/L~mg/L)、干扰少、分析精密度高等优点,可以同时测定多种元素,并且同一样品不同时间检测结果间的变异系数值小于3%。质谱流式细胞技术可以在单细胞层面对样本进行更多的参数检测，使细胞的研究更具深度和广度，是流式细胞技术一个新的发展方向。它能够实现更为精确全面的免疫分型及细胞内信号网络分析，在外部感染、自身免疫、肿瘤研究等领域有着广泛的应用前景。

参考文献：

Guojun Han, Matthew H. Spitzer, Sean C. Metal-isotope-tagged monoclonal antibodies for high-dimensional mass cytometry [J]. Nature protocols 13, 2121–2148 (2018).