博奥龙/biodragon 生物制品残留检测之内毒素残留检测——重组级联鲎试剂，重组C因子试剂与传统鲎试剂的区别

传统鲎试剂的检测原理及问题：

内毒素存在时，激活因子 C，依次激活因子 B 和凝固酶，最终导致底物切割（凝胶法和浊度法中的凝固蛋白原或者比色法中的显色多肽）。因此，级联反应机制放大了因子 C 的响应，实现高灵敏度检测，并且采用动力学测量。

然而，传统鲎试剂组分是从鲎的血细胞中提取出来的，当反应体系中有 1,3-β-D 葡聚糖存在时，会激活鲎试剂中的因子 G，也激活凝固酶，从而产生与 C 因子通路相同的信号，导致信号增强或者假阳性结果，如图片所示。

因此，为提高检测内毒素的特异性，需要通过去除 G 因子或抑制以 G 因子为起点的级联反应来检测，这就需要重组蛋白的内毒素检测试剂。

换句话说，如果样本中含有 β-葡聚糖干扰组分，那么使用重组的试剂就是更好的选择。

重组级联鲎试剂

实际上是复制了传统鲎试剂 LAL 的级联方法反应中的三种蛋白（C 因子、B 因子、凝固酶原，也叫“重组三因子”），排除了 G 因子的干扰因素，因此检测特异性大大提高。由于重组级联鲎试剂基本是复制了传统鲎试剂 LAL，所以，在操作和使用方面都很方便，所有的操作步骤、检测仪器、分析方法都跟传统鲎试剂 LAL 一样，实现无感替代。

重组 C 因子试剂

可以看做是重组级联鲎试剂的简化版，它只用了“重组三因子”的一个因子，即重组 C 因子。由于 C 因子试剂没有级联反应，产生的蛋白酶活性小，需要使用荧光底物进行荧光检测，需要荧光酶标仪。

三因子体系试剂与单因子体系试剂相比，酶活性较大，可产生显色反应，因此可以用普通的酶标仪来检测。

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内毒素检测试剂

动态显色法内毒素检测重组鲎试剂

Catalog No.: PUANNA-rCR001

【原理】

重组鲎试剂包含3个重组蛋白：Ｃ因子、Ｂ因子与凝固酶原。反应原理如图片所示，细菌内毒素激活 C 因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（p-NA，λmax=405 nm）。内毒素浓度越高，p-NA释放越快，吸光度变化越快。

【用途】

重组鲎试剂是一种传统药典测试方法的替代产品，可用于人类注射药物的最终产品测试（包括生物制品）、动物注射药物和医疗设备产品测试。关于替代测试方法验证的指导意见可在USP <1223>和<1225>中找到。此类方法已证明与药典方法性能相当或更优。本试剂盒检测方法也可用于定量检测非药典物品（包括水源基的原料以及过程监测）的内毒素含量，而无需进行方法验证。

重组鲎试剂不适用于检测临床样品中的内毒素，如诊断人类疾病（如内毒素血症）的临床样品中的内毒素。

重组C因子内毒素检测试剂

Catalog No.: PUANNA-rFC001

【原理】

重组C因子内毒素检测试剂是一种基于鲎血凝集系统的内毒素检测方法，它利用鲎血细胞中一种丝氨酸蛋白酶原——鲎C因子，该因子在细菌内毒素的作用下被激活，并切割特定的荧光底物，释放出可测量的荧光信号。

【用途】

本产品是一种替代鲎试剂的高效、安全、环保的内毒素检测方法，可用于人或动物类注射药物、生物制品、医疗器械等各类产品研发与生产过程中涉及的原辅材料、中间产物及最终产品中的内毒素检测。

重组C因子是通过基因工程技术在真核细胞中表达并纯化得到的，与动物源性的鲎试剂相比，具有以下优势：

« 重组C因子内毒素检测试剂只对内毒素敏感，不受G因子等旁路物质的干扰，具有更高的特异性和准确性；

« 重组C因子内毒素检测试剂采用终点荧光测定法，灵敏度高，线性范围广，可定量检测0.005-5 EU/mL的内毒素；

« 重组C因子内毒素检测试剂为液体试剂，操作简便，无需稀释或预热；

« 重组C因子内毒素检测试剂不依赖于动物源性成分，符合实验动物3R原则（减少、优化、替代），有利于保护鲎资源和生态环境

« 重组C因子内毒素检测试剂为基因工程产品，批间一致性好，供应稳定可靠。