人鼻咽上皮细胞(NP69)培养常见问题及解决办法

NP69人鼻咽上皮细胞基本信息

细胞名称：人鼻咽上皮细胞 （STR鉴定正确）

细胞别名：NP69SV40T，NP-69

产品货号：TCH-C440

种属来源：人

组织来源：鼻咽

疾病特征：—

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养体系：NP69专用基础培养基+1%生长因子+1%P/S

配套培养基货号：TCH-G440

传代比例：1:2-1:4，每2-3天换液一次

传代周期：24-48 h

培养条件：气相：94%空气+6%CO2，温度：37℃

NP69细胞培养要点

①　该细胞对培养基要求较高，推荐培养基为NP69专用培养基+1%生长因子+P/S，不能与其他培养基体系共用。

②　该细胞传代或复苏之后可能需要2天及以上才能完全贴壁，完全贴壁前尽量少移动细胞，换液时动作要轻，切勿使劲冲洗细胞。

③　细胞冻存需用无血清冻存液，推荐一步冻存液无需程序降温盒，-80℃放置24h后，转移至液氮长期储存。

NP69细胞常见问题与解决方法

问题1：培养细胞死亡

可能原因：

①  胰蛋白酶消化过度

②  支原体污染

③  消化液或培养液配置错误、过期储存或储存不当

④  细胞老化（如传代前细胞汇合度过高会导致其失去贴附性）

⑤  接种细胞起始浓度太低或太高

建议解决办法：

①  缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度，建议加入0.25%提前预热

的胰酶置于37℃消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细

胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化）

②  分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物并对实验环境进行消毒灭菌

③  重新配置消化液或培养液

④  启用新的保种细胞

⑤  调节最佳接种细胞浓度

问题2：细胞复苏失败

可能原因：

①  可能是未使用专用培养基复苏细胞

②  细胞复苏时解冻时间过长导致细胞死亡

③  细胞冻存前是否过密

建议解决办法：

①  推荐使用海星NP69细胞专用培养基，货号：TCH-G440

②  细胞复苏动作要快，手法要轻柔

③  在细胞冻存前调整合适的细胞密度