NK-92MI细胞培养注意事项

　　细胞名称：NK-92MI(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞)

　　细胞别称：NK-92MI MI;NK-92MI mi;NK92-MI;NK92MI;NK-92MI transfected with MFG-Hil2

　　细胞货号：SNL-195

　　生长特性：悬浮

　　培养条件：1640+10%FBS+1%P/S

　　培养环境：空气，95%；二氧化碳(CO2)，5%；37℃

　　细胞简介：NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株，亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化，可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。NK-92MI细胞细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体，其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体，处理后6周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测，结果都呈阴性。

　　NK-92MI细胞培养注意事项

　　NK-92MI细胞呈聚团悬浮生长，细胞团较大时需要吹打成小团，防止团块中间的细胞因营养不足而死亡。除非实验需要，不建议经常将细胞吹散成单个细胞，否则细胞状态将变差；

　　NK-92MI细胞对血清要求高，应该使用优质血清进行培养；

　　NK-92MI细胞对吹打等机械刺激敏感，不要吹打太多次，注意控制吹打力度轻柔；

　　NK-92MI细胞对温度敏感，培养基、PBS需复温至37℃再使用。

　　NK-92MI细胞冻存难度较大，建议使用90%FBS+10%DMSO冻存液，冻存密度推荐300万细胞/毫升，不能过低。冻存时细胞应吹散成单细胞。

　　复苏时建议将血清浓度提高至20%，待细胞可以正常聚集生长后再将血清浓度恢复至10%

　　NK-92MI细胞计数时算得的细胞的活率不能代表该细胞真实的状态。因为培养时存在一些散在的单细胞，这些细胞活性较低，且不能完全去除，导致在计数时细胞整体活率可能不高。细胞状态可以通过细胞能否聚团判断：只要大部分细胞能聚团生长，细胞状态就没有问题。当细胞状态不佳时，细胞无法顺利聚团。

　　当细胞状态不佳时，向培养基中按100-200U/mL补充IL-2，可有效改善。